酵母双杂交方案
一、 酵母双杂交技术原理及应用酵母转录因子GAL4含有DNA结合结构域(DNA-Binding domain BD)和转录激活结构域(activationdomain AD),前者可识别DNA上的特异序列,并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游, 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用,启动它所调节的基因的转录。DNA结合结构域(BD)和转录激活结构域(AD)可完全独立地发挥作用。将DNA结合结构域和转录激活结构域分别与bait蛋白和prey蛋白融合表达,若prey蛋白与bait蛋白发生相互作用时就可以将BD与AD在空间结构上重新联结为一个整体与报告基因的上游激活序列结合,发挥激活转录的功能,通过报告基因的表达可以验证两个蛋白的相互作用。

文库构建策略比较:

二、 实验流程
1、客户样品QC,total RNA提取(也可由客户直接提供total RNA)
2、利用磁珠分选进行mRNA分离
3、以mRNA为模板使用Clontech的SMART技术合成cDNA
4、使用磁珠分选进行cDNA分级分离高效去除小片段
5、将分级纯化的cDNA与pGADT7线性化载体进行同源重组
6、重组产物纯化后电转化DH10B感受态并涂布平板
7、cDNA文库质量验证
8、文库质粒提取
9、文库质粒转化酵母Y187(可选)

三、 相关实验结果案例展示
1、 total RNA提取结果:



四、 项目周期
35个工作日
五、 质量标准
1、原始文库容量大于10^7 CFU
2、平均插入片段大于1200 bp
3、克隆阳性率大于95%
六、 酵母文库交付结果
1、大肠杆菌文库甘油菌 1 mL/管 * 50管
2、文库质粒500 μg
3、酵母文库 1 mL/管 * 50管(可选)
4、文库构建相关图片与测序结果
5、文库构建报告
七、 材料要求
针对每个文库,客户需提供至少能提取500 μg总RNA的新鲜样本,或者至少500 μg的高质量总RNA。
客户下单
项目信息填写:
1.客户按照提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式进行预提交;
2.提交项目所需要的具体信息,包括:(1)已知的材料与组织信息;(2)尽可能丰富的相关资料、文献。
3.材料:用于提取total RNA的组织材料或者已提取好的total RNA;
实验信息
实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时90系统会通过短信自动通知客户,并发送实验报告查看地址。实验结题后,实验报告,检测结果可在线查看或打印,并永久保留。